摘要：考察了填充柱超臨界流體色譜法（SFC）中的樣品溶劑及連續(xù)進(jìn)樣等因素對化音物懾留行為變化的影響規(guī)律。 以超臨界C02或者低體積分散甲醇的CO2為流動相時，氨基柱上組分的保留時間隨著樣品溶劑的極性增大而增大，而溶劑對CO2柱上組分的保留時間影響不大；在CO2柱上，溶劑對連續(xù)進(jìn)樣的后續(xù)效應(yīng)不強(qiáng)，而在氨基柱上，甲醇溶液的后續(xù)效應(yīng)比丙酮、氧仿溶液的后續(xù)教應(yīng)強(qiáng) 當(dāng)甲醇的體積分?jǐn)?shù)大于1.0%時，溶劑的效應(yīng)明顯減弱，這種變化規(guī)律對填充柱SFC的合理進(jìn)樣并獲得重現(xiàn)性良好的色譜數(shù)據(jù)具有實際意義。
關(guān)鍵詞：超臨界流體色譜法；溶劑效應(yīng)；填充柱
1 前言
在超臨界流體色譜（supercritical fluid chromatography，SFC）中zui常用的流動相是CO2或含少量改性劑（如甲醇）的CO2，填充桂SFC采用硅膠、氨基、氰基、二醇基鍵臺相等填料作固定相．選使填充柱SFC成為一種正相色譜方法。正相色譜存在著選擇性、分離度等色譜參數(shù)對流動相中改性劑的含量敏感（因此重現(xiàn)性相對較差）、柱平衡體積大（約300～1000倍的桂體積）。時間長等缺點，這些在填充柱SFC中也有所體現(xiàn)，一般認(rèn)為選是因為樣品溶劑或改性劑（通常是甲醇）吸附在固定相表面形成一層液膜，或者改性劑覆蓋了固定相表面的活性點位，成為固定相的一部分，而這層“準(zhǔn)”固定相不易洗脫下來所造成的。有時即使表面上所有的組分都已洗脫。但在用1O～ 2O倍柱體積的流動相沖洗后，溶劑的殘余效應(yīng)仍然存在。這就對樣品溶劑的選擇、后續(xù)進(jìn)樣的時間把握提出了較高的要求。
本文考察了進(jìn)樣溶劑、連續(xù)進(jìn)樣、流動相中的改性劑用量．色譜拄類型等因索對化臺物保留行為變化的影響規(guī)律，為填充拄SFC的合理進(jìn)樣并產(chǎn)生可信的色譜結(jié)果提供依據(jù)。
2 儀器與試劑
超臨界流體色譜儀配置有100DM 注射泵、泵控制器．Eppendorf柱加熱器、V4 MWD紫外檢測器（ISCO，NE，USA）。本室設(shè)計的井聯(lián)裝置 在線添加改性劑。
150mm×1mm i．d．，3μm的Spherlsorb氨基，C18拄（Alltech，USA），Valco進(jìn)樣閥（定量環(huán)0.5μL），40cm×15 μm i．d．石英毛細(xì)限流管。甲苯、間氟甲苯、氯苯、對二甲苯、對氯甲苯、氯芐為AR級，補(bǔ)骨脂索對照品購自中國藥品生物制品檢定所。SFC級CO2購自上海比歐西氣體有限公司，甲醇、丙酮。氯仿均為色譜純。
3 結(jié)果和討論
氯苯、對二甲苯等化臺物的甲醇、丙酮、氯仿溶液在C18和氨基色譜柱上，以CO2為流動相得到的保留時間?？芍?。在C18柱上，不同的溶劑對組分的保留時間影響并不太；而在氨基柱上。組分的保留時間隨著溶劑的極性增大而增大。選是因為授性溶劑與氨基柱上的活性點位之間的作用比C18柱的作用強(qiáng)，因此甲醇的覆蓋作用zui大，經(jīng)覆蓋后固定相與組分之間的作用就zui弱．保留時間就zui小，而選種作用在C18柱上不明顯。圖中沒有列出氯芐的保留時間，相應(yīng)條件下氯芐在30min內(nèi)不洗脫。
選種覆蓋效應(yīng)可以通過連續(xù)進(jìn)樣方式下的保留時間變化來驗證。表列出了氯苯的甲醇、丙酮和氯仿溶液在進(jìn)樣分別間隔5，10，15min后再次進(jìn)樣所得的保留時間 （色譜條件同圖）。在C18柱上，溶劑對連續(xù)進(jìn)樣的后續(xù)效應(yīng)不強(qiáng)}在氨基柱上。丙酮、氯仿的后續(xù)效應(yīng)也不強(qiáng)，但甲醇的后續(xù)效應(yīng)較強(qiáng)。由于甲醇暫時覆蓋了固定相表面的活性點位，間隔5，10min進(jìn)樣時，氯苯的保留時回分別比進(jìn)樣縮短了0.35與0.14min。以流速0.08mL／min、色譜柱體積0.12mL×[π×（0.05cm）2×15cm≈0.118cm3]計算．進(jìn)樣約15min后，即流過10（O.08mL／min×15min÷0.118mL≈1O倍）體積的流動相后，這種覆蓋效應(yīng)基本清除，也就是說對后續(xù)進(jìn)樣沒有影響。這種效應(yīng)對太置樣品測定時的重現(xiàn)性有一定影響，需要注意并避免。
溶劑的覆蓋效應(yīng)在以純CO2作流動相時比較明顯，但加入一定置的改性劑（通常是甲醇）后，由于改性劑本身就對固定相存在持久的覆蓋效應(yīng)，因此溶劑以及連續(xù)進(jìn)樣對組分的保留時間影響較小。補(bǔ)骨脂紊的甲醇溶液連續(xù)進(jìn)樣的色譜圖可知，間隔時間較短的第2次進(jìn)樣，組分的保留時問提前較多（間隔10min，提前0.73min），反之較少（間隔20min，提前0.4min）。也就是說，即使整個樣品（包括溶劑、樣品）在10min內(nèi)都已洗脫完，但溶劑的覆蓋效應(yīng)仍將持續(xù)一段時間 當(dāng)有了足夠的間隔時間（>10倍柱體積的流動相流過后），則恢復(fù)到進(jìn)樣的效果。當(dāng)甲醇的體積分散太于1.0%時，不同溶劑引起的溶劑效應(yīng)以及連續(xù)進(jìn)樣時的覆蓋效應(yīng)都減弱，幾乎可以忽略不計。
4 結(jié)論
在填充柱SFC中，以純CO2或含少量（<1.0%）甲醇的CO2作流動相時，由于存在溶劑的覆蓋效應(yīng)，故應(yīng)合理選擇溶劑及進(jìn)樣時間間隔。改性劑濃度較高時，這種效應(yīng)可以忽略不計。本實驗結(jié)果對獲得良好的色譜數(shù)據(jù)，尤其是良好的重現(xiàn)性具有實際意義。
參考文獻(xiàn)
1 Steuer W．Schindler M ，Erni F J Chromatogr，1988．454：253-259