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PCR基因擴增儀工作原理及種類結(jié)構(gòu)

來源:上海撫生實業(yè)有限公司   2023年10月16日 13:57  

 PCR技術的本質(zhì)是核酸擴增技術,重復“變性(denature)→退火(anneal)→引物(primer)延伸(extension)”過程至25-40個循環(huán),呈指數(shù)級擴大待測樣本中的核酸拷貝數(shù),達到體外擴增核酸序列的目的。

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 PCR的基本原理:

在PCR技術的發(fā)展過程中,熱穩(wěn)定DNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)以及溫度循環(huán)的自動化大大簡化了PCR程序,使PCR的自動化成為可能,并在此基礎上不斷發(fā)展和改進。
PCR基因擴增儀的工作原理:
    PCR基因擴增儀工作關鍵是溫度控制。
1.水浴鍋控溫:以不同溫度的水浴鍋串聯(lián)成一個控溫體系。
2.壓縮機控溫:由壓縮機自動控溫,金屬導熱,控溫較第一代PCR基因擴增儀方便,但壓縮機故障率高,邊緣效應及溫度overshooting現(xiàn)象嚴重。
3. 半導體控溫:由半導體自動控溫,金屬導熱,控溫方便,體積小,相對穩(wěn)定性好。
4. 離心式空氣加熱控溫:由金屬線圈加熱,采用空氣作為導熱媒介,溫度均一性好,各孔擴增效率高度一致,滿足熒光定量PCR的高要求。
PCR擴增儀的分類與結(jié)構(gòu):
    PCR擴增儀的種類總體來說,可以分成兩大類,即普通PCR擴增儀和實時熒光定量PCR擴增儀。
1、 普通PCR擴增儀
1).普通PCR擴增儀即通常所謂的定性PCR擴增儀。
2).梯度PCR儀是由普通PCR儀衍生出的帶梯度PCR功能的基因擴增儀。
3).原位PCR儀是由普通PCR儀衍生出的帶原位擴增功能的基因擴增儀。
2、 實時熒光定量PCR擴增儀
1.金屬板式實時定量PCR儀,還可作為普通PCR儀使用,有的甚至帶梯度功能,可容納的樣本量大,無需特殊耗材,但溫度均一性欠佳,有邊緣效應,標準曲線的反應條件難以做到與樣品wan全一致。
2.離心式實時定量PCR儀的PCR擴增樣品槽被設計為離心轉(zhuǎn)子,溫度均一性好,但可容納樣品量少,有的需用特殊毛細管作樣品管,增加了使用成本,也不帶梯度功能。
3.各孔獨立控溫的定量PCR儀的不同樣品槽分別擁有獨立的智能升降溫模塊,各孔獨立控溫,適合多指標快速檢測,可實現(xiàn)任意梯度反應,但上樣不如傳統(tǒng)方法方便,而且需要du特的扁平反應管,使用成本較高。


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