ELISA法轉(zhuǎn)錄因子活性的特點與流程

        ELISA法檢測轉(zhuǎn)錄因子活性，核心是將其DNA結(jié)合能力轉(zhuǎn)化為可定量信號，比傳統(tǒng)EMSA靈敏度高10倍，5小時內(nèi)即可完成，且無需放射性物質(zhì)和凝膠電泳，安全便捷，適合高通量篩選。

        實驗方法特點

        高靈敏度?：能檢測到轉(zhuǎn)錄因子水平的微小變化，對細(xì)胞功能研究至關(guān)重要。

        高通量?：微孔板形式可同時檢測1-96個樣本，效率遠(yuǎn)高于EMSA。

        操作簡便?：無需凝膠電泳和放射性標(biāo)記，實驗流程更安全、快速。

        定量準(zhǔn)確?：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可精確計算轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合活性。

        標(biāo)準(zhǔn)操作流程

        樣本制備?：提取細(xì)胞核蛋白，確保轉(zhuǎn)錄因子活性完整。

        包被?：將生物素標(biāo)記的DNA探針包被于微孔板。

        結(jié)合?：加入核蛋白樣本，轉(zhuǎn)錄因子與探針特異性結(jié)合。

        檢測?：加入HRP標(biāo)記的抗體，與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，再加入底物顯色。

        讀數(shù)?：用酶標(biāo)儀測定450nm吸光度值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算活性。

        注意事項

        核蛋白提取需快速，避免蛋白酶降解。

        探針設(shè)計需針對目標(biāo)轉(zhuǎn)錄因子的特定DNA結(jié)合位點。

        嚴(yán)格控制孵育時間和溫度，確保結(jié)合特異性。

        洗滌需凈，避免非特異性信號干擾。

        注意：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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