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昆蟲(chóng)蛋白研究在當(dāng)今社會(huì)是比較普遍的。 相比于大腸桿菌，昆蟲(chóng)細(xì)胞能完成更復(fù)雜的蛋白翻譯后修飾，表達(dá)出更接近天然構(gòu)象的功能性蛋白。
但是蛋白表達(dá)過(guò)程是復(fù)雜的，每一步都至關(guān)重要，尤其在蛋白提取實(shí)驗(yàn)上，選對(duì)方法很重要。
下面一起看看昆蟲(chóng)蛋白提取的方法：
實(shí)驗(yàn)步驟
1.樣品準(zhǔn)備：收獲經(jīng)離心濃縮的昆蟲(chóng)細(xì)胞沉淀，用預(yù)冷的裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑）量懸，制成均勻的細(xì)胞懸液。
2.儀器準(zhǔn)備與參數(shù)設(shè)置：將凈信高壓均質(zhì)機(jī)連接已經(jīng)預(yù)冷的冷水機(jī)（需要提前半小時(shí)預(yù)冷）以維持低溫環(huán)境。將細(xì)胞懸液加入料杯。設(shè)定破碎壓力（例如400 bar）和循環(huán)次數(shù)（通常1-3次）。
3.細(xì)胞均質(zhì)完成后，及時(shí)收集樣品，放置在冰箱里，
4.后處理與分析：通過(guò)SDS-PAGE、Western Blot、ELISA或活性測(cè)定等方法，對(duì)目標(biāo)蛋白生物活性進(jìn)行綜合分析。
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