生物制品的生產(chǎn)依賴于微生物、動物或植物細(xì)胞、動物源或人源組織、體液等起始原材料，其安全核心在于嚴(yán)格控制外源因子污染。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）的定義，外源因子包括非預(yù)期存在于生產(chǎn)用原材料、生產(chǎn)過程或終產(chǎn)品中的任何生物性物質(zhì)，如細(xì)菌、真菌、支原體、立克次體、病毒（含朊病毒）、寄生蟲，以及具有感染性或干擾性的核酸、蛋白類物質(zhì)等。外源因子的威脅不僅來自人類病原體，還包括各類動物病原體。即便這些病原體對人類無直接致病性，但也可能對生物制品的安全性與有效性構(gòu)成不良影響。

01歷史教訓(xùn)：那些改變行業(yè)的污染事件

外源因子污染的代價，往往使人觸目驚心。生物制品一旦受到污染，造成的后果可能很嚴(yán)重，甚至導(dǎo)致患者死亡。比如1929年德國卡介苗事件導(dǎo)致72名嬰兒死亡，1970-1990年英國凝血因子污染事件造成約2.5萬人感染HIV/HCV。

表1. 生物制品重大外源因子污染事件回顧

這些事件揭示了一個共同的問題：外源因子污染的核心多為“隱性污染+原材料引入”，促使行業(yè)逐漸從“被動檢測”轉(zhuǎn)向“主動防控+全鏈條溯源”的管理模式。同時，CAR-T細(xì)胞治療、AAV基因治療、mRNA疫苗等新型生物制品的快速放行需求，也在加速推動檢測技術(shù)的革新。

02技術(shù)革新：核酸擴(kuò)增技術(shù)NAT

目前，生物制品外源因子檢測方法主要有培養(yǎng)法（體外培養(yǎng)法、動物體內(nèi)接種法）、透射電鏡法、PCR法。不同方法各有優(yōu)劣，需根據(jù)檢測目標(biāo)靈活選擇。

表2. 生物制品外源因子檢測方法

培養(yǎng)法長期被視為細(xì)菌、真菌、支原體檢查的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但檢測周期長。體外培養(yǎng)法依賴于指示細(xì)胞對特定病毒的敏感性，可能造成無法感染指示細(xì)胞的病毒漏檢。動物體內(nèi)接種法只能檢出能感染動物且產(chǎn)生癥狀的病毒，且存在個體反應(yīng)差異、周期長、倫理問題等局限性。

核酸擴(kuò)增技術(shù)（Nucleic Acid Amplification Technology，NAT）憑借“精準(zhǔn)識別、微量擴(kuò)增、快速檢測”的核心優(yōu)勢，已被多國藥典收錄為生物制品外源因子檢測的替代方法方法，成為生物安全檢測領(lǐng)域的核心技術(shù)支撐。

NAT技術(shù)有效彌補(bǔ)了傳統(tǒng)培養(yǎng)法的不足：

①無法識別滅活的外源因子

②難以檢測低活力病原體

③檢測周期長，如分枝桿菌的培養(yǎng)長達(dá)56天

④受宿主細(xì)胞限制，存在漏檢風(fēng)險

其中，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)和下一代測序（NGS）技術(shù)在病毒檢測中較為常用。

03法規(guī)依據(jù)：藥典與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的認(rèn)可

面對“PCR檢測是否能夠滿足注冊申報要求”的疑問，各國藥典和工業(yè)指南已給出明確答案：NAT技術(shù)已成為外源因子檢查的重要工具。接下來我們將列舉一些藥典或工業(yè)指南對NAT技術(shù)的支持依據(jù)。

1，在病毒檢測方面

美國FDA：

1993年《Points to Consider in the Characterization of Cell Lines Used to Produce Biologicals》中提到：PCR擴(kuò)增可為生物制品細(xì)胞系中是否存在特異性病毒污染提供更多有價值的信息，認(rèn)可了PCR擴(kuò)增在細(xì)胞系病毒污染物檢測中的價值。

2010年《Characterization and Qualification of Cell Substrates and Other Biological Materials Used in the Production of Viral Vaccines for Infectious Disease Indications》中也明確提出：在病毒不易培養(yǎng)的情況下，PCR技術(shù)是評估細(xì)胞基質(zhì)是否受此類病毒污染的有效工具，其中還強(qiáng)調(diào)了PCR技術(shù)在人源病毒、猴源病毒、昆蟲病毒檢測中發(fā)揮著重要作用。

ICH Q5A（R2）：

2023年更新發(fā)布的《來源于人或動物細(xì)胞系生物技術(shù)產(chǎn)品的病毒安全性評價》中也明確規(guī)定：核酸擴(kuò)增技術(shù)可用于檢測種屬特異性病毒，可用來替代部分動物實驗且無需開展頭對頭比較，明確提出分子生物學(xué)方法可用于補(bǔ)充因干擾受限的細(xì)胞培養(yǎng)法，還可作為感染性試驗細(xì)胞培養(yǎng)中無法生長的特異性病毒檢測的有效工具。

各國藥典：

《美國藥典》USP41-NF36<1237>《Virology Test Methods》指出，定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qPCR）可作為直接檢測病毒感染的終點法之一，包括逆轉(zhuǎn)錄酶檢測、鼠細(xì)小病毒（MVM）檢測、蟲媒病毒檢測、人源病毒檢測等；

《歐洲藥典》11.0版5.2.3章節(jié)《Cell substrates for the  production of vaccines for human use》中同樣提到，核酸擴(kuò)增（2.6.21章節(jié)）可檢測種屬特異性病毒。

《中國藥典》2025版通則0234《生物制品生產(chǎn)用動物細(xì)胞基質(zhì)制備及質(zhì)量控制》中規(guī)定，經(jīng)驗證的分子生物學(xué)方法可用于檢測種屬特異性病毒。

2，其他外源因子檢測

支原體檢測：

《歐洲藥典》11.0版2.6.7章節(jié)《Mycoplasmas》和《日本藥典》XVIII<G3-14-170>《Mycoplasma Testing for Cell Substrates Used for the Production of Biotechnological / Biological Products》均提出，經(jīng)驗證的NAT法可用于支原體檢測，同時提供相關(guān)驗證流程。

分枝桿菌檢測：

《歐洲藥典》11.0版5.2.3章節(jié)和《中國藥典》2025版通則0234同時提出，可采用經(jīng)驗證的核酸檢測方法作為分枝桿菌培養(yǎng)法的替代方法。

螺原體檢測：

《歐洲藥典》11.0版和《中國藥典》2025版也提出，檢測支原體的NAT法在通過適當(dāng)驗證后，可用于螺原體檢測。

結(jié)語：

總之，核酸擴(kuò)增技術(shù)（NAT）以其高靈敏度、高特異性、快速檢測的核心優(yōu)勢，正在重塑生物制品外源因子檢測的技術(shù)格局。從被動響應(yīng)到主動防控，從單一方法到多元互補(bǔ)，NAT技術(shù)已成為生物安全領(lǐng)域的“分子偵-探”。面對日益復(fù)雜的生產(chǎn)原材料、不斷縮短的放行周期要求，以及新型治療技術(shù)的涌現(xiàn)，掌握并熟練運用NAT技術(shù)已成為生物安全檢測人員的核心能力。

義翹神州生物安全檢測實驗室

義翹神州生物安全檢測實驗室已通過CNAS、ISO 9001認(rèn)證，嚴(yán)格按照GMP和GLP質(zhì)量體系運行，擁有成熟的NAT技術(shù)體系，可用于病毒及支原體、分歧桿菌等外源因子檢測，成功支持客戶完成IND和BLA申報。另外，義翹神州提供的工藝驗證數(shù)據(jù)可支持中外雙報，滿足出海需求。

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