大鼠谷胱甘肽還原酶(GSR)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)說明書

　　BS-3507大鼠谷胱甘肽還原酶(GSR)ELISA試劑盒

　　一、實(shí)驗(yàn)原理

　　本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測大鼠谷胱甘肽還原酶(GSR)活性。 將抗大鼠GSR抗體包被于微孔板中，加入待測樣本后，樣本中的GSR與包被抗體結(jié)合。隨后加入生物素標(biāo)記的檢測抗體，形成“抗體-抗原-酶標(biāo)抗體”復(fù)合物。 加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的鏈霉親和素(SABC)后，通過TMB底物顯色，在450nm波長下測定吸光度(OD值)，OD值與樣本中GSR濃度呈正相關(guān)。

　　二、試劑盒組成

　　組分 48孔配置 96孔配置 保存條件

　　預(yù)包被酶標(biāo)板 8×6條 8×12條 2-8℃

　　標(biāo)準(zhǔn)品(凍干) 1支 1支 2-8℃

　　標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液 10mL 15mL 2-8℃

　　生物素化檢測抗體 60μL(100×) 120μL(100×) -20℃

　　生物素化抗體稀釋液 6mL 12mL 2-8℃

　　SABC復(fù)合物 6mL 12mL 2-8℃

　　TMB顯色液(A/B) 各3mL 各6mL 避光2-8℃

　　終止液 6mL 12mL 2-8℃

　　20×濃縮洗滌液 30mL 60mL 室溫

　　封板膜 2片 4片 室溫

　　說明書 1份 1份 -

　　三、樣本處理

　　血清/血漿樣本?：

　　全血室溫靜置2小時或4℃過夜，1000g離心20分鐘，取上清。

　　避免溶血或高血脂樣本，2-8℃可保存48小時;長期保存需-20℃或-80℃，避免反復(fù)凍融。

　　組織/細(xì)胞樣本?：

　　組織勻漿或細(xì)胞裂解后，離心取上清，蛋白濃度調(diào)整至推薦范圍。

　　四、實(shí)驗(yàn)步驟

　　洗滌液配制?：

　　將20×濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋20倍(如1mL濃縮液+19mL蒸餾水)。

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：

　　取7支離心管，標(biāo)注1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、空白(Blank)。

　　每管加入200μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液，首管加入200μL標(biāo)準(zhǔn)品原液，混勻后逐級稀釋。

　　加樣與孵育?：

　　每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，37℃孵育90分鐘。

　　棄去液體，洗滌3次(每次浸泡1-2分鐘)。

　　酶標(biāo)抗體反應(yīng)?：

　　每孔加入100μL生物素化檢測抗體(按1:100稀釋)，37℃孵育60分鐘。

　　洗滌3次。

　　SABC復(fù)合物反應(yīng)?：

　　每孔加入100μL SABC復(fù)合物，37℃孵育30分鐘。

　　洗滌3次。

　　顯色與終止?：

　　每孔加入90μL TMB顯色液(A/B液等量混合)，避光37℃孵育15分鐘。

　　每孔加入50μL終止液，混勻后立即測定。

　　五、結(jié)果計算

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X)，OD值為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　根據(jù)樣本OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計算GSR濃度。

　　六、注意事項

　　試劑保存?：

　　標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化抗體需-20℃保存，避免反復(fù)凍融;其他組分2-8℃保存。

　　樣本處理?：

　　避免使用溶血、高血脂或渾濁樣本;組織樣本需充分勻漿。

　　操作規(guī)范?：

　　移液需精確，避免交叉污染;洗滌需，殘留液體影響結(jié)果。

　　儀器校準(zhǔn)?：

　　酶標(biāo)儀波長需校準(zhǔn)至450nm，空白孔調(diào)零。

　　安全防護(hù)?：

　　終止液含硫酸，操作時佩戴手套和護(hù)目鏡。

　　七、預(yù)期結(jié)果

　　靈敏度：可檢測低至0.156ng/mL的GSR。

　　線性范圍：0.156-10ng/mL。

　　八、應(yīng)用范圍

　　本試劑盒適用于大鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞培養(yǎng)上清液中GSR的定量檢測，科研用途。

　　提示?：具體操作請以實(shí)際試劑盒說明書為準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)前需閱讀完整說明并確認(rèn)組分完整性。

　　注：以上僅供參考，本試劑僅供科研使用，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。