影響高效液相色譜儀檢測(cè)準(zhǔn)度的幾個(gè)常見因素?
高效液相色譜儀檢測(cè)準(zhǔn)度受多環(huán)節(jié)影響,常見核心因素有5 個(gè),每個(gè)因素都直接關(guān)系到檢測(cè)結(jié)果的定性與定量準(zhǔn)確性,下面用通俗易懂的語(yǔ)言拆解說(shuō)明:
流動(dòng)相的配制與穩(wěn)定性流動(dòng)相是樣品組分的 “運(yùn)輸載體”,其配比、純度、pH 值都會(huì)影響分離效果。比如配比誤差哪怕只有 1%,也會(huì)讓組分的出峰時(shí)間偏移;使用低純度溶劑會(huì)引入雜質(zhì)峰,干擾目標(biāo)峰的識(shí)別;pH 值偏離要求會(huì)導(dǎo)致某些極性組分峰形拖尾、分裂,甚至無(wú)法出峰。另外,流動(dòng)相使用前需超聲脫氣,若氣泡殘留,會(huì)堵塞色譜柱或檢測(cè)器管路,造成基線波動(dòng)、檢測(cè)信號(hào)異常。
色譜柱的狀態(tài)與選型色譜柱是分離的 “核心戰(zhàn)場(chǎng)”,選不對(duì)型號(hào)或柱效下降,直接導(dǎo)致檢測(cè)失效。不同固定相的色譜柱適配不同類型樣品(如 C18 柱適合檢測(cè)非極性 / 弱極性組分,氨基柱適合糖類),選型錯(cuò)誤會(huì)讓目標(biāo)組分和雜質(zhì)峰重疊。同時(shí),色譜柱長(zhǎng)期使用會(huì)積累污染物,導(dǎo)致柱效降低,表現(xiàn)為峰形變寬、分離度變差;新柱未活化、舊柱未充分沖洗,也會(huì)造成基線漂移、檢測(cè)結(jié)果偏差。
樣品前處理的規(guī)范性樣品前處理是 “去蕪存菁” 的關(guān)鍵,處理不到位會(huì)帶來(lái)大量干擾。比如食品、藥品樣品中含有的蛋白質(zhì)、脂肪、色素等雜質(zhì),若未通過(guò)萃取、凈化、過(guò)濾等步驟去除,會(huì)污染色譜柱、堵塞管路,還會(huì)掩蓋目標(biāo)峰;樣品濃度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致 “過(guò)載峰”,峰形畸變無(wú)法準(zhǔn)確定量;樣品溶劑與流動(dòng)相不兼容,會(huì)造成組分析出,直接影響檢測(cè)結(jié)果。
儀器參數(shù)的設(shè)置與校準(zhǔn)柱溫、流速、檢測(cè)器波長(zhǎng)等參數(shù)設(shè)置,需與樣品特性匹配。此外,儀器未定期校準(zhǔn)(如進(jìn)樣量校準(zhǔn)、檢測(cè)器靈敏度校準(zhǔn)),會(huì)引入系統(tǒng)誤差,導(dǎo)致定量結(jié)果不準(zhǔn)。
環(huán)境與操作的干擾檢測(cè)環(huán)境的溫度、濕度波動(dòng),會(huì)影響流動(dòng)相的黏度和色譜柱的性能;實(shí)驗(yàn)室存在的揮發(fā)性有機(jī)物,可能進(jìn)入儀器管路造成污染。操作上的人為誤差也不可忽視,比如進(jìn)樣時(shí)的氣泡、進(jìn)樣量不一致、進(jìn)樣針污染等,都會(huì)直接反映在檢測(cè)數(shù)據(jù)上。
溫度對(duì)高效液相色譜儀檢測(cè)有影響嗎?




