以下是ELISA實(shí)驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品稀釋的關(guān)鍵步驟和注意事項(xiàng)，綜合多個(gè)高可信度來源整理：

　　一、標(biāo)準(zhǔn)品溶解準(zhǔn)備?

　　離心處理?

　　開蓋前短暫離心(如1000 rpm/1min)，使管壁殘留粉末沉底。

　　若為凍干粉，避免直接吹吸，需靜置溶解15-30分鐘。

　　復(fù)溶緩沖液選擇?

　　血清/血漿樣本：使用試劑盒配套稀釋液。

　　細(xì)胞上清樣本：建議用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋。

　　二、梯度稀釋操作?

　　稀釋方法?

　　倍比稀釋法?：每管加入等體積稀釋液，從高濃度管(如S1)轉(zhuǎn)移至低濃度管(S2-S7)，吹打混勻10次。

　　混勻技巧?：

　　溫和顛倒或低速彈撥，避免蛋白變性。

　　稀釋后短暫離心回收管壁殘留液體。

　　濃度梯度設(shè)置?

　　常用范圍：1000 pg/mL至15.6 pg/mL(以IL-2為例)。

　　空白對(duì)照：直接用稀釋液作為零濃度對(duì)照。

　　三、質(zhì)量控制?

　　穩(wěn)定性驗(yàn)證?

　　分裝凍存于-80℃，避免反復(fù)凍融。

　　檢測OD值波動(dòng)(應(yīng)<15%)、加標(biāo)回收率(80-120%)。

　　曲線質(zhì)量評(píng)估?

　　R2值需≥0.99，標(biāo)準(zhǔn)曲線呈S型且中間線性良好。

　　異常排查：檢查稀釋液pH、溫度波動(dòng)(25±2℃)。

　　四、特殊樣本處理?

　　脂溶性標(biāo)準(zhǔn)品?：先用含5% DMSO緩沖液預(yù)溶，再梯度稀釋。

　　高粘度液體?：稀釋前短暫離心，減少掛壁誤差。

　　五、記錄要求?

　　詳細(xì)記錄溶解時(shí)間、操作者、緩沖液批號(hào)及存儲(chǔ)位置。

　　關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)建議雙人復(fù)核操作流程。

　　通過規(guī)范操作可顯著提高ELISA實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和準(zhǔn)確性。

　　注：以上資料僅供參考，具體詳情來咨詢技術(shù) 老師或品牌供應(yīng)商。

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