ELISA實驗：標(biāo)準(zhǔn)品稀釋步驟指南

　　天正信達(dá)為您詳細(xì)講解ELISA實驗中稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的關(guān)鍵步驟和注意事項。這是實驗成功與否的基石，精確的稀釋決定了標(biāo)準(zhǔn)曲線的質(zhì)量，從而直接影響最終結(jié)果的準(zhǔn)確性。

　　一、核心原則

　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋的目的是創(chuàng)建一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)點，用以繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(通常為S型或線性化后的直線)。未知樣本的濃度將通過此曲線計算得出。因此，稀釋的精確性和一致性至關(guān)重要。

　　二、實驗前準(zhǔn)備

　　試劑與材料：

　　標(biāo)準(zhǔn)品凍干粉:從冰箱中取出，室溫靜置15-20分鐘平衡至室溫。

　　標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液:務(wù)必使用試劑盒指定的專用稀釋液。不同的檢測目標(biāo)(細(xì)胞因子、激素等)可能需要不同的基質(zhì)(如血清、血漿模擬液)，以避免干擾。

　　去離子水或超純水：用于復(fù)溶凍干粉。

　　無菌離心管(1.5mL EP管)、試管或細(xì)胞培養(yǎng)板(用于系列稀釋)。

　　精確的可調(diào)移液器(如P1000, P200, P20)及匹配的、潔凈的低吸附吸頭。

　　渦旋混合器 和 小型離心機(jī)。

　　理解說明書：

　　仔細(xì)閱讀試劑盒說明書，確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)品的初始濃度(如 1000 pg/mL)和需要復(fù)溶的體積(如 500 μL)。

　　確認(rèn)說明書建議的標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍(如 7.8 pg/mL - 500 pg/mL)和稀釋倍數(shù)。常見的梯度是倍比稀釋(Serial Dilution)。

　　三、操作步驟

　　第一步：復(fù)溶

　　離心：將標(biāo)準(zhǔn)品凍干粉管短暫離心(如 3000 rpm, 1分鐘)，使粉末集中到管底，避免開蓋時損失。

　　加液：加入說明書指定體積的去離子水或指定的復(fù)溶液。

　　混勻：輕輕渦旋(避免產(chǎn)生過多氣泡)或上下吹打至少1分鐘，確保粉末溶解。切勿劇烈振蕩。

　　靜置：室溫靜置10分鐘，使其充分水化。此時溶液的濃度即為最高濃度儲備液(Stock Solution)。

　　第二步：配制最高濃度點

　　取一個潔凈試管，加入一定體積的稀釋液(例如 900 μL)。

　　吸取一定體積的復(fù)溶后的標(biāo)準(zhǔn)品儲備液(例如 100 μL)加入稀釋液中。

　　輕輕渦旋或吹打混勻。此管濃度即為標(biāo)準(zhǔn)曲線的最高濃度點(例如，1000 pg/mL儲備液稀釋10倍，得到 100 pg/mL的最高點)。

　　示例：若儲備液為1000 pg/mL，要配制500 pg/mL的最高點，可采取1:1稀釋(如500μL儲備液 + 500μL稀釋液)。

　　注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說明請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。